操作范围
1. BEH Amide国产精品18久久久可在pH 2~11的HILIC条件下运行常规分析,操作温度可达90 °C。
2. 和其他LC国产精品18久久久一样,在pH、压力和温度的极值下运行会缩短国产精品18久久久使用寿命。
国产精品18久久久平衡
初次使用本国产精品18久久久时,用50倍柱体积的60%乙腈:40%水溶液(或初始条件)平衡国产精品18久久久。
初次进样之前,用20倍柱体积的流动相(初始条件)平衡国产精品18久久久。
如果采用梯度条件,在进样之间用8~10倍柱体积的流动相平衡国产精品18久久久。
国产精品18久久久平衡不当会导致保留时间漂移。
流动相注意事项
1. 流动相或梯度中应始终保持至少3%的极性溶剂(例如3%水、3%甲醇或2%水/1%甲醇等)。
2. 推荐使用含缓冲液的流动相而不是添加剂。为获得理想分析结果,应始终保持缓冲盐浓度至少为10 mM。
3. 如果要使用添加剂,建议始终保持添加剂浓度至少为0.2%。
4. 流动相或梯度中应始终保持至少40%的有机溶剂(例如乙腈)。
5. 水相比例大于60%时,应使用较低的流速,避免柱压过高。此要求适用于所有的清洗步骤。
6. 避免在HILIC流动相中使用磷酸盐缓冲液以防止出现析出,但可以使用磷酸。
进样溶剂
1. 如果可能,进样溶剂应尽可能接近流动相组分(如果是等度分析)或起始梯度条件。除非安装了正己烷/四氢呋喃兼容性套件,否则切勿将丙酮用作样品溶剂/稀释剂。
2. 通用的进样溶剂为75:25乙腈/甲醇,该溶剂可以很好地平衡分析物溶解性和峰形。分离在有机溶剂中溶解度不高的糖类时,允许样品中含有浓度较高的水相溶剂。使用50:50乙腈/水可获得满意的结果。
3. 进样溶剂对峰形的影响应通过实验确定。在某些情况下,进样水(或高含水量溶液)可能并不会对峰形造成不利影响。
其他技巧
1. 初步探索色谱条件时,可运行95%乙腈至50%乙腈的梯度。若无保留,可运行95:3:2乙腈:甲醇:水相缓冲液的等度条件。
2. 可使用诸如甲醇、丙酮或异丙醇之类的极性溶剂代替水以增强保留性能。
3. 确保弱针清洗溶剂/灌注溶剂采用的是起始流动相(即高比例有机相),否则会对峰形造成不利影响。典型针清洗条件:800μL强清洗液20:80 ACN/H2O中,500μL弱清洗液75:25 ACN/H2O。
4. 除非安装了正己烷/四氢呋喃兼容性套件,否则切勿将丙酮用作样品溶剂/稀释剂。