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BEH Amide国产精品18久久久分离单糖、二糖、多糖的技巧

更新时间:2024-10-24&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;点击次数:429

1. 如果分离不含还原糖(如下文所示)的糖类或含糖化合物,请遵循前文的一般建议。

2. 如果分离还原糖,请查看以下信息。

3. 还原糖可以发生变旋,导致α环与β环形式的糖(差向异构体)产生,这是一种不良分离。

4. 升高温度和pH值可使差向异构体合并成一个峰:

5. 35 ℃下使用高pH0.2%叁乙胺(TEA)0.1%氨水(NH4OH))和/

6. 在高温下(> 80 )使用0.05% TEA (>80 )

7. 分离还原糖(例如果糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、甘油醛等)时,请注意遵循以下建议。否则会导致这些分析物出现分裂峰(差向异构体分离):

a. 以低流速运行(例如,在2.1 x 50 mm国产精品18久久久上流速设置为0.10~0.13 mL/min),促进差向异构体峰合并。

b. 国产精品18久久久较长时,可采用较高的流速(例如0.3 mL/min)。和所有LC分离一样,理想流速应通过实验来确定。

c. 向两个流动相(例如A2B2等)储液瓶中加入叁乙胺(TEA)或氨水(NH4OH)改性剂。

d. 对于单糖和/或二糖的UPLC/ELSD分离,典型的等度UPLC条件包括:

i. 含有0.2% TEA75%乙腈(ACN)35 °C0.13 mL/min2.1 x 50 mm BEH Amide国产精品18久久久;

ii. 含有0.05% TEA77%丙酮,85 °C0.15 mL/min2.1 x 50 mm BEH Amide国产精品18久久久;

iii. 含有0.2% TEA75% ACN35 °C0.2 mL/min2.1 x 100 mm BEH Amide国产精品18久久久。

e. 对于更复杂的糖类混合物(例如多糖)的UPLC-ELSD分离,典型的梯度UPLC条件包括(流动相AB中都需要添加TEA):

i. 10 min内梯度从80%变化至50% ACN(含0.2% TEA),35 °C0.13 mL/min2.1 x 100 mm BEH Amide国产精品18久久久,或使用2.1 x 150 mm BEH Amide国产精品18久久久(流速升至0.3 mL/min);

ii. 10 min内丙酮从80%变化至55%(含0.05% TEA),85 °C0.15 mL/min2.1 x 100 mm BEH Amide国产精品18久久久。

f. 对于单糖和二糖的UPLC-MS分离,典型的等度UPLC条件包括:

i. 75%ACN + 0.1% NH4OH35 ℃,0.13 mL/min2.1 x 50 mm BEH Amide国产精品18久久久。

g. 对于更复杂的糖类混合物(例如多糖)的UPLC-MS分离,典型的梯度UPLC条件包括(流动相AB中都需要添加NH4OH):

i. 10 min内梯度从75%变化至45%ACN(含有0.1%NH4OH),35 °C0.2 mL/min2.1 x 100 mm

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6. 更复杂的样品混合物可能需要使用梯度条件和/或更长的UPLC国产精品18久久久。

7. 如果在一种或多种流动相中使用了丙酮,请勿使用丙酮作为样品稀释剂或针清洗溶剂。有关样品稀释剂建议和针清洗溶剂/灌注溶剂建议的其他技巧(3),请参阅进样溶剂部分。

8. 含糖/多糖/碳水化合物时,典型样品前处理建议如下:

a. 液体样品

i. 使用50:50 ACN/H2O稀释。

ii. 使用0.45μm0.22μm针式过滤器过滤(如有必要)。

b. 固体样品

i. 称取约3g样品放入50 mL离心管中。

ii. 加入25 mL 50:50 ACN/H2O,混合均匀(机械混匀)。

iii. 3200 rpm下离心30 min

iv. 收集上清液,使用0.45μm0.22μm针式过滤器过滤(如有必要)。

c. 视样品和/或分析物浓度而定,可能需要对样品进行额外稀释。

d. 更复杂并且/或者分析物浓度更低的样品可能需要额外的样品前处理步骤(例如固相萃取(SPE))。

e. 考虑使用VanGuard BEH Amide保护柱保护UPLC国产精品18久久久。

f. 建议通过在工作流程中加入HILIC质量控制(QC)参比物质来监控系统的运行状况。


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