1. 如果分离不含还原糖(如下文所示)的糖类或含糖化合物,请遵循前文的一般建议。
2. 如果分离还原糖,请查看以下信息。
3. 还原糖可以发生变旋,导致α环与β环形式的糖(差向异构体)产生,这是一种不良分离。
4. 升高温度和pH值可使差向异构体合并成一个峰:
5. 在35 ℃下使用高pH(0.2%叁乙胺(TEA)或0.1%氨水(NH4OH))和/或
6. 在高温下(> 80 ℃)使用0.05% TEA (>80 ℃)。
7. 分离还原糖(例如果糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、甘油醛等)时,请注意遵循以下建议。否则会导致这些分析物出现分裂峰(差向异构体分离):
a. 以低流速运行(例如,在2.1 x 50 mm国产精品18久久久上流速设置为0.10~0.13 mL/min),促进差向异构体峰合并。
b. 国产精品18久久久较长时,可采用较高的流速(例如0.3 mL/min)。和所有LC分离一样,理想流速应通过实验来确定。
c. 向两个流动相(例如A2、B2等)储液瓶中加入叁乙胺(TEA)或氨水(NH4OH)改性剂。
d. 对于单糖和/或二糖的UPLC/ELSD分离,典型的等度UPLC条件包括:
i. 含有0.2% TEA的75%乙腈(ACN),35 °C,0.13 mL/min,2.1 x 50 mm BEH Amide国产精品18久久久;
ii. 含有0.05% TEA的77%丙酮,85 °C,0.15 mL/min,2.1 x 50 mm BEH Amide国产精品18久久久;
iii. 含有0.2% TEA的75% ACN,35 °C,0.2 mL/min,2.1 x 100 mm BEH Amide国产精品18久久久。
e. 对于更复杂的糖类混合物(例如多糖)的UPLC-ELSD分离,典型的梯度UPLC条件包括(流动相A和B中都需要添加TEA):
i. 10 min内梯度从80%变化至50% ACN(含0.2% TEA),35 °C,0.13 mL/min,2.1 x 100 mm BEH Amide国产精品18久久久,或使用2.1 x 150 mm BEH Amide国产精品18久久久(流速升至0.3 mL/min);
ii. 10 min内丙酮从80%变化至55%(含0.05% TEA),85 °C,0.15 mL/min,2.1 x 100 mm BEH Amide国产精品18久久久。
f. 对于单糖和二糖的UPLC-MS分离,典型的等度UPLC条件包括:
i. 75%ACN + 0.1% NH4OH,35 ℃,0.13 mL/min,2.1 x 50 mm BEH Amide国产精品18久久久。
g. 对于更复杂的糖类混合物(例如多糖)的UPLC-MS分离,典型的梯度UPLC条件包括(流动相A和B中都需要添加NH4OH):
i. 10 min内梯度从75%变化至45%ACN(含有0.1%NH4OH),35 °C,0.2 mL/min,2.1 x 100 mm
BEH Amide国产精品18久久久。
6. 更复杂的样品混合物可能需要使用梯度条件和/或更长的UPLC国产精品18久久久。
7. 如果在一种或多种流动相中使用了丙酮,请勿使用丙酮作为样品稀释剂或针清洗溶剂。有关样品稀释剂建议和针清洗溶剂/灌注溶剂建议的其他技巧(#3),请参阅进样溶剂部分。
8. 含糖/多糖/碳水化合物时,典型样品前处理建议如下:
a. 液体样品
i. 使用50:50 ACN/H2O稀释。
ii. 使用0.45μm或0.22μm针式过滤器过滤(如有必要)。
b. 固体样品
i. 称取约3g样品放入50 mL离心管中。
ii. 加入25 mL 50:50 ACN/H2O,混合均匀(机械混匀)。
iii. 在3200 rpm下离心30 min。
iv. 收集上清液,使用0.45μm或0.22μm针式过滤器过滤(如有必要)。
c. 视样品和/或分析物浓度而定,可能需要对样品进行额外稀释。
d. 更复杂并且/或者分析物浓度更低的样品可能需要额外的样品前处理步骤(例如固相萃取(SPE))。
e. 考虑使用VanGuard BEH Amide保护柱保护UPLC国产精品18久久久。
f. 建议通过在工作流程中加入HILIC质量控制(QC)参比物质来监控系统的运行状况。